《生化危机9》采用《生化危机4：重制版》章节制结构。里昂和雪莉都被感染，但并非所有浣熊市幸存者都会发病。病毒类似带状疱疹的表现形式——会在部分感染者身上发作，但并非人人都会出现症状。玩家先操作格蕾丝，然后切换到里昂，之后在两人之间反复轮换。
游戏中可解锁武器共有12把，包括里昂的三连发Matilda手枪。有两套可解锁服装(每位主角一套)。墨带需要用“空墨带+墨盒”自行制作，目前尚未看到成品墨带，可能必须手动合成。
保时捷只出现在过场动画中，暂未发现可驾驶环节。克莱尔以“挂件”形式登场(类似《生化危机4：重制版》靶场挂件)，目前不确定是否会亲自出场。
格蕾丝需要很长时间才能拿到枪，前期需专注潜行。可通过制造声响分散敌人注意力。敌人对光源有反应，熄灭打火机会更利于潜行。普通僵尸会主动关闭灯光，让大型怪物更容易接近你，甚至会“蹲守”电灯开关。灯光长时间开启后可能会损坏，坏掉后无法再次使用。
《生化危机9》有多个结局，在坏结局中，里昂将会死亡。而在好结局中，他会走一条“类似吉尔的路线”——感染被治愈，身体甚至会出现明显的年轻化变化。
吉尔、克莱尔和艾达王都不会在《生化危机9》中出现，而暴君和死神汉克将回归。汉克还会和里昂展开一场Boss战，据称里昂会亲手杀死他。复仇女神也将回归，如果玩家选择了好结局路线，他将成为最终Boss，由维克多亲自为自己注射寄生体变身而来。
《生化危机9》在Switch2上以30帧运行，支持光线追踪。其他主机/PC版表现无需担心，优化看起来相当稳健。
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